style="width:0.54673in;height:0.46684in" />GB/T 13087—2020 本文是学习GB-T 13087-2020 饲料中异硫氰酸酯的测定方法. 而整理的学习笔记,分享出来希望更多人受益,如果存在侵权请及时联系我们
本标准规定了饲料中异硫氰酸酯的气相色谱测定方法。
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和饲料原料中异硫氰酸酯的测定。
本标准的检出限为2 mg/kg, 定量限为5 mg/kg。
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GB/T 5520 粮油检验 发芽试验
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 20195 动物饲料 试样的制备
试样中的硫葡萄糖苷在 pH7.0
缓冲液中，在白芥子酶作用下生成丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫
氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯，用二氯甲烷提取，脱水、过滤后以气相色谱仪测定，内标法定量，结果以丙
烯基异硫氰酸酯计。
除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.1 水 ：GB/T 6682,一级。
4.5 柠檬酸溶液(0.1 mol/L): 准确称取4.20 g 柠檬酸(C₆HsO, ·H₂O)
溶解于水中，用水稀释并定容
至200 mL, 混匀。临用现配。
4.6 磷酸氢二钠溶液(0.2 mol/L): 准确称取28.39 g 无水磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)
溶解于水中，用水稀
释并定容至1 L,混匀。临用现配。
4.7 盐酸溶液(0.01 mol/L): 准确移取0.9 mL 浓盐酸，用水稀释并定容至1 L,
混匀。
4.8 氢氧化钠溶液(0.01 mol/L): 准确称取0.40 g
氢氧化钠加水溶解，用水稀释并定容至1 L, 混匀。
4.9 pH7.0 缓冲溶液：量取176.5 mL 柠檬酸溶液(4.5)于1000 mL
容量瓶中，用磷酸氢二钠溶液(4.6) 稀释并定容至1000 mL,
混匀，用盐酸溶液(4.7)或氢氧化钠溶液(4.8)调整 pH 至7.0。临用现配。
4.10 白芥子酶：称取50 g 白 芥(Sinapis alba L.)种子(按照GB/T
5520做发芽试验，72 h 内发芽率应 大于85%,保存期不超过两年)粉碎后，置于500
mL 烧杯中，加入100 mL 石油醚(4.3),搅拌2 min,静
置，弃去上层液体，重复脱脂10次，使脂肪含量低于2%,置通风橱内使溶剂挥干，然后再粉碎一次，
GB/T 13087—2020
80%通过0.28 mm
试验筛，装在密闭容器中，置于-18℃以下保存，有效期为6个月。为保证白芥子
酶活性，制备过程中环境温度应保持在30℃以下，两次粉碎注意少量多次，防止粉碎机过热。
4.11 丁基异硫氰酸酯内标溶液(0.1 mg/mL): 准确称取50 mg (精确至0.00001
g)丁基异硫氰酸酯 [CH₃ (CH₂)₃NCS,CAS 号：592-82-5,纯度≥99%]于500 mL
棕色容量瓶中，用二氯甲烷溶解并定容，
混匀，于-18℃以下保存，有效期为3个月。
4.12 异硫氰酸酯混合标准溶液(1.0 mg/mL): 分别准确称取10 mg (精确至0.00001
g)丙烯基异硫氰 酸酯 [CH₂= CHCH₂NCS,CAS 号：57-06- 7,纯度≥99 .
7%]、丁烯基异硫氰酸酯 [CH₂=
CHCH₂CH₂NCS,CAS 号：3386-97-8,纯度≥95 .0%]、戊烯基异硫氰酸酯
[CH₂=CHCH₂
CH₂CH₂NCS,CAS 号：18060-79-2,纯度≥95.0%]于10 mL
棕色容量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶
液(4.11)溶解并定容，混匀，于一18℃以下保存，有效期3个月。
4.13
异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液：精确移取适量异硫氰酸酯混合标准溶液(4.12)于10
mL 容
量瓶中，用丁基异硫氰酸酯内标溶液(4.11)稀释定容配制成标准系列工作溶液，丙烯基异硫氰酸酯、丁
烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的浓度分别为0 mg/mL、0.001 mg/mL、0.02
mg/mL、 0.05 mg/mL、0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1.0 mg/mL。
丁基异硫氰酸酯内标浓度均为0.1 mg/mL。 临 用 现配。
4.14 定性滤纸：快速，内径7.0 cm。
5.1 气相色谱仪：配有氢火焰检测器(FID)。
5.2 分析天平：感量0.01 g、0.0001g 和0.00001 g。
5.4 振荡器：往复，不低于200次/min。
5.5 离心机：转速不低于5000 r/min。
按照GB/T 20195 规定制备试样，至少200 g,粉碎使其全部过0.42 mm
分析筛，混合均匀，装入密
闭容器中，备用。
平行做两份试验。称取约2.0 g(精确至0.0001 g)试样置于100 mL
具塞三角瓶中，加入0.5 g 白 芥子酶(4.10)、5.0 mL pH7.0 缓冲溶液(4.9)、10
mL 丁基异硫氰酸酯内标溶液(4. 11),于室温下 200次/min振荡提取2
h,将具塞三角瓶中内容物全部转入离心试管中，5000 r/min 离心10 min,取下
层溶液，用铺有2g～3g 无水硫酸钠层的定性滤纸过滤，滤液备用。
色谱柱：聚乙二醇(FFAP) 毛细管柱，长30 m, 内径0.32 mm, 膜厚0.25 μm,
或性能相当者。
色谱柱温度：起始温度100℃,保持10 min, 以10℃/min 升到200℃,保持2 min。
进样口温度：220℃。
检测器温度：230℃。
style="width:0.54673in;height:0.46684in" />GB/T 13087—2020
载气：高纯氮气。
载气流速：1.0 mL/min。
氢气流速：35 mL/min。
空气流速：400 mL/min。
尾吹流速：20 mL/min。
进样量：1 μL。
分流比：5:1。
在仪器的最佳条件下，分别取异硫氰酸酯混合标准系列工作溶液(4.13)和试样溶液(7.1)上机测
定。各异硫氰酸酯标准溶液的气相色谱图参见附录 A。
以保留时间定性，试样溶液中各异硫氰酸酯保留时间应与标准溶液中各异硫氰酸酯的保留时间一
致，其相对偏差在士2.5%之内，内标法定量。
试样中异硫氰酸酯(以丙烯基异硫氰酸酯计)的含量以质量分数 w
计，数值以毫克每千克(mg/kg)
表示，按式(1)计算：
style="width:4.61333in;height:0.61996in" /> (1)
式中：
Wa 、Wb 、Wp
——试样中丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的含
量，单位为毫克每千克(mg/kg);
99.15、113.18、127.21——分别为丙烯基异硫氰酸酯、丁烯基异硫氰酸酯和戊烯基异硫氰酸酯的摩
尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol)。
试样中各异硫氰酸酯的含量以质量分数 w; 计，数值以毫克每千克(mg/kg)
表示，多点校正按式
(2)计算，单点校正按照式(3)计算：
style="width:2.15326in;height:0.6468in" /> …………………… (2)
式中：
p;——
由标准曲线得出的试样溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
V— 提取溶液的体积，单位为毫升(mL);
m—- 试样质量，单位为克(g)。
式中：
style="width:3.30667in;height:0.69226in" />
…………
………
(3)
A,— 试样溶液中各异硫氰酸酯色谱峰面积；
A' 混合标准溶液中丁基异硫氰酸酯内标的峰面积；
pis ——
用于校准的混合标准溶液中各异硫氰酸酯的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
pe - 试样溶液中丁基异硫氰酸酯内标的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
GB/T 13087—2020
V 试样提取溶液的体积，单位为毫升(mL);
A。 — 试样溶液中丁基异硫氰酸酯内标的峰面积；
A;s— 用于校准的混合标准溶液中各异硫氰酸酯的峰面积；
p'。 —
混合标准溶液中丁基异硫氰酸酯内标的质量浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);
m — 试样质量，单位为克(g)。
测定结果以平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。
在重复性条件下，应符合下述规定：
当异硫氰酸酯含量小于或等于100 mg/kg
时，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不超
过该算术平均值的15%;当异硫氰酸酯含量大于100 mg/kg
时，两次独立测定结果与其算术平均值的
绝对差值不超过该算术平均值的10%。
GB/T 13087—2020
(资料性附录)
异硫氰酸酯标准溶液气相色谱图
异硫氰酸酯标准溶液气相色谱图，见图 A.1。
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tfmin
说明：
1——丙烯基异硫氰酸酯；
2——丁基异硫氰酸酯(内标);
3——丁烯基异硫氰酸酯；
4——戊烯基异硫氰酸酯。
图 A.1 异硫氰酸酯标准溶液(0.1 mg/mL) 气相色谱图
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